苯甲酸、山梨酸均属酸性防腐剂，具有广范围的抑菌作用；而糖精钠价格低廉，作为甜味剂添加方便，适用面广。食品卫生标准对三者的使用剂量和范围有严格限制，在允许的剂量和范围内使用时绝对安全的，但长期过量使用会对人体造成危害。本检测由食品检验人员依据GB/T23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》，对两种样品（碳酸饮料、糕点）中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠进行检测。
苯甲酸
山梨酸
糖精钠
实验准备
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试剂与仪器 |
说明 |
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主要试剂：甲醇、氨水、乙酸铵、超纯水、苯甲酸钠、山梨酸钾、糖精钠 |
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主要仪器：高效液相色谱（配紫外检测器） |
实验选用岛津SIL-20A高效液相色谱仪配紫外检测器（UVD） |
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实验样品：碳酸饮料、糕点 |
市售碳酸饮料和糕点 |
试剂配置
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试剂 |
操作步骤 |
说明 |
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甲醇（色谱纯） |
经0.5μm滤膜过滤 |
过滤时，选用有机相膜 |
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乙酸铵溶液（0.02mol/L） |
称取1.54g乙酸铵，加超纯水至1000mL，溶解，经0.45μm滤膜过滤 |
过滤时，选用水相膜 |
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氨水（1+1） |
将50mL氨水与50mL水等体积混合 |
即浓氨水与等体积的水混合 |
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苯甲酸标准储备液 |
准确称取0.236g苯甲酸钠，加水溶解并定容至200mL |
溶液浓度1.00mg/mL |
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山梨酸标准储备液 |
准确称取0.268g山梨酸钾，加水溶解并定容至200mL |
溶液浓度1.00mg/mL |
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糖精钠标准储备溶液 |
准确称取0.1702g糖精钠（120℃烘干4h），加水溶解并定容至200mL |
溶液浓度1.00mg/mL |
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混合标准使用液 |
分别准确吸取不同体积苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备液，将其稀释成苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量分别为0.000mg/mL、0.020 mg/mL、0.040 mg/mL、0.080 mg/mL、0.160 mg/mL、0.320 mg/mL的混合标准使用液体 |
液相色谱仪的开机和系统平衡
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操作步骤 |
说明 |
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（1）将流动相装入流动相瓶中，插入吸滤头，置于托盘中 |
吸滤头插入液面以下 |
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（2）安装国家标准GB/T 23495-2009中色谱条件所要求的色谱柱 |
注意柱子的方向 |
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（3）接通电源，依次开启稳压电源、输液泵、柱温箱、检测器、系统控制器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑启动工作站软件 |
启动工作站软件后查看是否处于“就绪”状态，若不是，查找原因，重新启动软件 |
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（4）打开排液阀，按purge键排液2~3分钟，purge完毕后关闭排液阀，启动输液泵，平衡系统，直至基线水平 |
勿忘排液阀的开启关闭 |
样品的处理
1、碳酸饮料
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操作步骤 |
说明 |
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（1）称取10g样品（精确至0.001g）于25mL容量瓶中 |
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（2）用氨水（1+1）调节PH至近中性，用水定容至刻度，混匀 |
用PH试纸指示酸碱度 |
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（3）经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析 |
微孔滤膜有水相和有机相两种，注意选择 |
2、糕点
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操作步骤 |
说明 |
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（1）称取粉碎均匀样品2g~3g（精确至0.001g）于小烧杯中 |
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（2）用20mL水分数次清洗小烧杯将样品移入25mL容量瓶中 |
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（3）超声震荡提取5min |
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（4）加入2mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2mL乙酸锌溶液，摇匀，用水定容至刻度 |
注意再加入一种试剂后一定要充分摇匀 |
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（5）移入离心管中，4000r/min离心5min，吸出上清液，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析 |
务必平衡对应摆放离心管 |
上机测定
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操作步骤 |
说明 |
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（1）在工作站软件“分析”窗口中设定仪器测定条件 |
窗口不要选择错误 |
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（2）设置相关样品信息，取待测标准系列溶液和样液各10μL，进样检测 |
注意手动进样的规范操作和保存数据文件 |
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（3）在工作站软件“再解析”窗口中绘制标准曲线 |
窗口不要选择错误 |
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（4）以其标准溶液峰的保留时间为依据做定性分析，并依据标准曲线求出样品溶液中被测物质的含量做定量分析，打印标准曲线、样品的色谱图和相关数据 |
注意保存方法文件 |
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（5）清洗手动进样阀，以5%的甲醇冲洗各泵和柱子，约15min，关闭液相色谱系统各设备所有电源，倾倒废液 |
注意清洗的规范操作 |
结果计算
样品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量按下式计算
X=（c*V*1000）/（m*1000）
式中：
X——样品中待测组分含量，单位为克每千克（g/kg）；
c——由标准曲线得出样液中待测液的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；
V——样品定容体积，单位为毫升（mL）；
M——样品质量，单位为克（g）。
说明：
（1）计算结果保留两位有效数字；
（2）精密度：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
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